- 品名： TaKaRa Small RNA 克隆試劑盒
- 品牌： TaKaRa
- 型號(hào)： RR065
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
商品名稱(chēng)：Small RNA Cloning Kit
商品編號(hào)：SPU2021051358
上架時(shí)間：2022-01-05
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| ■ 制品內(nèi)容 (10 次量) |
| □ Package1 (-20℃保存) RNase Inhibitor (40 U/μl)50 μl10X BAP Buffer200 μlAlkaline Phosphatase (BAP) (0.4 U/μl)20 μl0.1%BSA60 μl3’Adaptor*1*210 μlT4 RNA Ligation Buffer600 μlT4 RNA Ligase (40 U/μl)20 μl5X T4 PNK Buffer100 μlT4 Polynucleotide Kinase (T4 PNK) (10 U/μl)10 μl5’Adaptor*110 μl5X RT Buffer40 μldNTP Mixture (2.5 mM each)90 μlPCR-R & RT-Primer (50 pmol/μl)*1*320 μlRTase (RNaseH free) (200 U/μl)10 μl2X PCR Buffer250 μlPCR Primer F (50 pmol/μl)*110 μlTaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl)10 μlControl RNA (5 pmol/μl)*410 μl□ Package2 (4℃保存) 3M Sodium Acetate (pH 5.2)200 μlDr.GenTLE Precipitation Carrier*580 μl2X B/W Buffer2.7 mlMagnosphere? MS300/Streptavidin100 μlRNase free dH2O10 ml *1 3’Adaptor、5’Adaptor、PCR Primer F及PCR-R、RT-Primer上都帶有Sse8387Ⅰ酶切位點(diǎn)，使用Sse8387Ⅰ酶切后的PCR產(chǎn)物可以與Pst I酶切的載體進(jìn)行連接克隆。本試劑盒中不備有限制酶和克隆用載體，請(qǐng)另外準(zhǔn)備。*2 3’Adaptor已用生物素標(biāo)記。*3 PCR用的Reverse Primer，也可以作為反轉(zhuǎn)錄引物使用。*4 Control RNA是一條21mer、5’端磷酸化的RNA。*5 Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094)。 |
| ■ 制品說(shuō)明 |
| 近幾年的研究表明，在細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)的RNA中有許多是非編碼RNA，它們有著重要的功能，這些RNA被稱(chēng)為功能性RNA，其中倍受關(guān)注的是18-26 個(gè)堿基的低分子RNA，這些低分子RNA的功能有：① mRNA水平抑制基因表達(dá)。② 翻譯水平抑制基因表達(dá)。克隆是分析小RNA的有效方法之一。由于小RNA與mRNA不同，它不具有PolyA tail，因此，在克隆時(shí)，需在小RNA的5’端和3’端分別加上RNA接頭或者RNA/DNA雜合形式的接頭，經(jīng)RT-PCR后進(jìn)行PCR。本試劑盒主要用于cDNA的合成和小RNA的克隆。試劑盒通過(guò)簡(jiǎn)單的磁珠吸附操作即可純化小RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA，省去了在接頭連接之后切膠回收等復(fù)雜操作步驟。擴(kuò)增得到的cDNA可以直接用于TA克隆，或者利用接頭中帶有的酶切位點(diǎn)進(jìn)行克隆。使用本試劑盒對(duì)小RNA (Small RNA) 進(jìn)行克隆時(shí)的操作流程見(jiàn)圖1。起始的Small RNA是由總RNA 經(jīng)過(guò)電泳及切膠回收得到的。詳細(xì)步驟如下：1. 將Small RNA進(jìn)行BAP處理，5’端去磷酸化。2. 將帶有生物素標(biāo)記的RNA/DNA雜合形式的接頭與BAP處理后的Small RNA的3’端進(jìn)行連接。3. 用標(biāo)記Streptoavidin的磁珠，回收帶有生物素標(biāo)記接頭的Small RNA，然后進(jìn)行5’端磷酸化反應(yīng)。4. 將5’端連接上RNA/DNA嵌合的接頭后，使用RT Primer和反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。5. 從磁珠上回收合成的cDNA后，進(jìn)行PCR反應(yīng)。6. PCR片段克隆。 |
| ■ 各種引物及Control RNA的堿基序列 |
| 名 稱(chēng)切 點(diǎn)酶 例PCR-R & RT-Primer 5’-GTCTCTAGCCTGCAGGATCGATG-3’反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及PCR反應(yīng)的Reverse引物，含有Sse8387Ⅰ的識(shí)別序列 (陰影部分)。PCR-Primer F5’-AAAGATCCTGCAGGTGCGTCA-3’PCR反應(yīng)的Forward引物，含有Sse8387Ⅰ的識(shí)別序列 (陰影部分)。Control RNA 5’p-AGAUGACGGCAACUACAAGAC-3’用于Control反應(yīng)。 |
| ■ small RNA克隆流程圖 |
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| SmallRNACloningKit | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝量 |
| Takara | RR065 | SmallRNACloningKit | 10次 |
暫無(wú)內(nèi)容...
